Un dosage colorimétrique est envisageable quand qu'une réaction chimique donne des produits colorés et si l'intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration de l'élément à doser. Les dosages colorimétriques s'appuient sur la loi de Beer-Lambert.

Un dosage colorimétrique est aussi envisageable en utilisant des indicateurs colorés tels que l'hélianthine, la phénol phtaléine, le vert de bromocrésol etc. qui vont se colorer à pH différents et par conséquent, vont pouvoir indiquer lorsque on atteint l'équivalence.

Loi de Beer-lambert

La forme utilisé est la suivante :

• A : absorbance de la solution sans unité
• ε : cœfficient d'extinction molaire en L×mol^-1×cm^-1 (quelquefois noté avec un ξ)
• l : longueur de cuve traversée par la lumière en cm
• C : concentration molaire en mol×L^-1

La mesure de l'absorbance est donnée par un spectrophotomètre qui mesure la densité optique. Plus une solution est colorée, plus la lumière a du mal à traverser, par conséquent plus l'absorbance de la solution augmente.

Protocole général des dosages colorimétriques

Conditions générales de réalisation

Pour réaliser un dosage colorimétrique, certaines conditions doivent être remplies :

• la réaction doit donner une coloration proportionnelle à la concentration
• la coloration doit être stable le temps de faire les mesures
• le composé à analyser doit être dans des concentrations particulièrement faibles
• la gamme étalon doit être réalisée dans les mêmes conditions physico-chimique que les essais
• la longueurs d'onde du spectrophotomètre doit être celle qui permet la plus forte absorbance envisageable

si ces premières conditions sont remplies, un dosage colorimétrique peut être envisageable.

Réalisation d'une gamme d'étalonnage

Pour régler le spectrophotomètre, la réalisation d'une gamme d'étalonnage est indispensable (sauf pour les kits vendus dans le commerce). La gamme d'étalonnage sert à déterminer une absorbance à une longueur d'onde donnée pour une concentration en composé recherché. Il faut par conséquent préparer une solution de l'élément à doser de faible concentration. Lors de la réalisation de la gamme, le volume de solution doit être semblable dans l'ensemble des tubes. Or les volumes de réactifs doivent rester constants pour permettre la réaction et les quantités de composé à doser doivent fluctuer dans chaque tube. Il faudra par conséquent compléter avec de l'eau distillée à un même volume pour que les tubes soit au même niveau de solution. Un tube 0 ou blanc doit impérativement être réalisé pour annuler l'absorbance due aux réactifs eux-mêmes. Ce tube ne contient pas de composé à doser La réalisation des gammes d'étalonnage demande énormément de précision, et doit être plutôt, réalisée dans les mêmes conditions que les essais.

Réalisation d'un tableau colorimétrique

Pour vous aider, la réalisation d'un tableau colorimétrique permet d'éviter des erreurs lors de la réalisation de protocoles fastidieux et de noter vos résultats. Voici en exemple le tableau colorimétrique du Dosage du glucose par le DNS.

Tableau colorimétrique (résultats expérimentaux)

Tubes	0	1	2	3	4	5	x1	x2
Solution de glucose à 0, 01 mol/L en mL	0	0, 3	0, 6	0, 9	1, 2	1, 5	0	0
Eau en mL	18	17, 7	17, 4	17, 1	16, 8	16, 5	17, 5	17
DNS en mL	2	2	2	2	2	2	2	2
Essais en mL	0	0	0	0	0	0	0, 5	1
Absorbance à 350 nm	0	0, 205	0, 494	0, 748	1, 022	1, 280	0, 668	1, 340
Quantité de matière en µmol	0	3	6	9	12	15	7.94	?

Lecture des résultats

Lors de l'obtention des valeurs d'absorbances (Densités Optiques), il faut tracer la droite d'absorption suivant les quantités de composé par tube.

La droite doit passer par l'origine du repère et par l'ensemble des valeurs si le dosage a été bien réalisé. Reportez à cette droite les valeurs d'absorbance de vos essais pour déterminer la quantité de composé présent. Pour remonter à la concentration en composé présent dans le produit, n'oubliez pas les dilutions envisageables ou les quantités de matière qui ont été utilisées.

Voir aussi

• • Dosage du glucose par le DNS
• Dosage du phosphore par la méthode de Briggs (colorimétrique)
• Dosage des protéiques par la réactif de Biuret (colorimétrique)
• Dosage des protéiques par la méthode de l'acide bicinchoniques (BCA) (colorimétrique)

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